Определение резус-фактора цоликлонами: порядок проведения
Точное знание резус-принадлежности доноров крови и реципиентов плановых трансфузий необходимо для безопасного проведения переливаний. Кроме этого, типирование крови беременных женщин или женщин, планирующих беременность, по системе «Резус» необходимо для предотвращения и/или профилактики резус-конфликта в случаях, если отцом ребенка является или будет мужчина с резус-положительной кровью, а матерью ребенка — женщина с резус-отрицательной.
Определение резус-фактора цоликлонами https://sangvitest.ru/opredelenie-rezus-faktora-coliklonami/ проводится по следующему алгоритму:
1) На первом этапе выявляется наличие сильной формы этритроцитарного антигена D. Для этого малое количество образца крови (одна капля) смешивается с цоликлоном Анти-D Cупер (раствор в черных флаконах) на плоскости или в пробирке. Если происходит быстрая и четкая реакция агглютинации (слипание красных кровяных клеток в хлопья и выпадение их в осадок), то исследуемая кровь является резус-положительной (Rh+), а ее эритроциты несут антиген D.
2) Если явная и четкая геммагглютинация не наблюдается, производится следующий анализ, в котором выявляются слабые формы эритроцитарного антигена D. Для исследования применяются неполные антитела (так называемые антитела класса IgG). Эти антитела не дают прямой реакции агглютинации, и анализ проводится в присутствии усилителя агглютинации (как правило, высокомолекулярного соединения, например, полиглюкина или желатина). Эритроциты исследуемого образца крови инкубируются с моноклональным реагентом ЭРИТРОТЕСТ-ЦОЛИКЛОН Анти-D и усилителем в течение десяти минут при температуре примерно 47 градусов Цельсия. Если произошло образование хорошо различимых глобул или хлопьев — произошла конглютинация, — кровь типируется как Rh+, резус-положительная. В противном случае (реакция конглютинации не произошла), кровь является резус-отрицательной Rh-. Для данного исследования по определению резус-фактора цоликлонами в обязательном порядке следует проводить так называемый отрицательный контроль — инкубация исследуемых эритроцитов с усилителем без реагента цоликлон Анти-D, реакции конглютинации происходить не должно.
Если же и в этом анализе получен спорный результат (например, мелкозернистая или нечеткая конглютинация), то дополнительно проводится непрямая проба Кумбса. В этом исследовании эритроциты исследуемой крови (отмытые) сначала инкубируются с реагентом ЭРИТРОТЕСТ-ЦОЛИКЛОН Анти-D (неполные антитела класса IgG) при температуре 37 градусов Цельсия в течении получаса. Затем отделенные центрифугированием эритроциты промываются еще раз физраствором и осторожно смешиваются с антиглобулиновой сывороткой. При наблюдении агглютинации кровь типируется как Rh+, а при отсутствии реакции агглютинации — как Rh-. Определение слабых форм эритроцитарного антигена D должно проводиться для цельной донорской крови и для полученных из нее эритроцит-содержащих препаратов. Для резус-отрицательных доноров следует выполнять исследование на наличие фенотипов dCe или dcE при помощи реагентов Цоликлон Анти-C, Цоликлон Анти-E и Цоликлон Анти-CE.
